Miglioramento delle strategie di trattamento dei Tumori Epiteliali Timici (TETs)

Background: Thymic epithelial tumors (TETs) are rare and extremely heterogeneous malignances (the annual global incidence varies from 1.3 to 3.2 per milion persons and constitute the 0.2-1.5% of tumors in adults). Despite the efforts to deeply characterize the biology of these tumors, more information are needed to better identify potential biomarkers linked to carcinogenesis and to develop new target therapies. Among others, angiogenesis plays a key role in the onset of the disease: Svascular endothelial growth factor (VEGF) is overexpressed in TETs, and its expression and microvessel density are generally associated with invasiveness and more advanced stage. The aim of the work is to implement the knowledge of molecular biology of these tumors, with the possibility to identificate new biological markers with a prognostic relevance or able to predict response to antitumoral treatments, expecially those anti-angiogenetic. Patients and methods: A retrospective analysis of 78 patients with istological confirmation of TETs referred to Clinica Oncologica of Università Politecnica delle Marche - AOU Ospedali Riuniti of Ancona has been made. Genomic DNA has been extracted from paraffinated tissue and whole blood samples by using kit RecoverAllTM Total Nucleic Acid Isolation (ThermoFisher) and kit Flexigene 3 ml Blood (Qiagen), respectively. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) of has been studied from 57 genomic DNA samples through Real -Time PCR, using Taq Assay. Particular attention will be focused to those known to be associated to anti-angiogenic process. In a prospective study that enrolls patients referred to Clinica Oncologica of Ancona with histological confirmation of TETs, miRNA expression will be explored from plasma samples at baseline (t0) e after 6 weeks from the start of an antiangiogenetic investigational drug treatment (t1). The miRNA extraction will be done by using microRNA TaqMan Assay by 7300 AB System PCR technology. Expression analysis will be done by using miRCURY® LNA® miRNA SYBR® Green PCR technology. Results: SNPs on angiogenenis-linked genes, Platelet Derived Growth Factor Receptor- (PDGFR-), VEGFR-2, VEGFR-3 and HIF1-α significantly correlated with prognosis. miRNAs extracted from 4 patients enrolled in our center at different timepoints will be analyzed with miRNA sequencing technique to evaluate their differential expression. Conclusions: Analysis of SNPs and evaluation of miRNA expression profile would implement the knowledge of TETs biology and would help the identification of new biomarkers with a prognostic relevance or able to predict response to treatments, expecially those anti-angiogenetic. This work will support the scientific basis for the development of new successful therapeutic strategies, in particular anti-VEGFR approaches to gain better efficacy.

Background: I tumori epiteliali del timo (TETs) sono malattie rare ed estremamente eterogenee (il tasso di incidenza annuale nel mondo varia tra 1.3 e 3.2 per milione di persone e costituiscono lo 0.2-1.5% di tutte le neoplasie negli adulti). Nonostante gli avanzamenti nella conoscenza della biologia dei TETs, un’approfondita caratterizzazione biomolecolare è necessaria per identificare nuovi fattori implicati nella carcinogenesi e sviluppare terapie bersaglio efficaci. Tra le varie, l’angiogenesi gioca un ruolo chiave nell’insorgenza della malattia: il Fattore di Crescita Endoteliale Vascolare (VEGF) è iperespresso in questi tumori e generalmente associato ad una maggiore invasività e uno stadio più avanzato di malattia. L’obiettivo dello studio è quello di implementare le conoscenze nell’ambito della biologia dei TETs, con la possibilità di identificare nuovi biomarcatori con una rilevanza prognostica o in grado di predire la risposta alle terapie, in particolare anti-angiogeniche. Pazienti e metodi: È stata effettuata l’analisi retrospettiva di una casistica di 78 pazienti con confermata istologia di TETs. DNA genomico è stato estratto mediante kit RecoverAllTM Total Nucleic Acid Isolation, ditta ThermoFisher (da campioni di tessuto paraffinato) e kit Flexigene 3 ml Blood, ditta Qiagen (da campioni di sangue). Sul DNA genomico di 57 campioni sono stati analizzati Polimorfismi a Singolo Nucleotide (SNPs), con focus particolare su geni implicati nell’angiogenesi, mediante la metodica RT-PCR, Taq Assay. Nell’ambito di uno studio prospettico in cui è coinvolto il centro, è prevista la valutazione di miRNA circolanti da campioni di plasma di pazienti arruolati con confermata istologia di TETs al baseline (t0) e dopo 6 settimane dall’inizio del trattamento sperimentale con farmaci antiangiogenici (t1). La valutazione dell’espressione di miRNAs selezionati, identificati mediante tecnologia microRNA TaqMan Assay by 7300 AB System PCR, verrà analizzata con tecnica miRNA è miRCURY® LNA® miRNA SYBR® Green PCR. Risultati: Gli SNPs a carico dei geni implicati nell’angiogenesi, ossia PDGFR-α (Platelet-Derived Growth Factor Receptor-), VEGFR-2e VEGFR-3, HIF1-α (Hypoxia-inducible factor 1-) hanno mostrato una significativa correlazione con la prognosi. miRNA circolanti estratti da 4 pazienti arruolati nel nostro centro ai differenti timepoints verranno sottoposti ad analisi di miRNA sequencing per la valutazione del differente profilo di espressione. Conclusioni: L’analisi di SNPs e la valutazione dell’espressione di miRNA potrà implementare la conoscenza della biologia dei TETs e aiuterà nell’identificazione di nuovi biomarcatori con rilevanza prognostica o in grado di predire la risposta ai trattamenti, specie quelli anti-angiogenici. Questo lavoro supporterà le basi scientifiche per lo sviluppo di terapie di successo, in particolare con approcci anti-VEGFR, per ottenere una migliore efficacia.