Role of paraoxonase-2 in bladder cancer: effect of gene silencing and overexpression on cell proliferation, migration and chemoresistance.​

ROLE OF PARAOXONASE-2 IN BLADDER CANCER: EFFECT OF GENE SILENCING AND OVEREXPRESSION ON CELL PROLIFERATION, MIGRATION AND CHEMORESISTANCE. Purpose: Bladder cancer (BC) represents the 7th most common neoplasm in men and the 17th most common in women, worldwide. The identification of reliable biomarkers becomes essential for both early diagnosis and effective therapy of BC. Paraoxonase-2 (PON2) exhibits anti-oxidant and anti-apoptotic activity. Therefore, the aim of this study was to explore the involvement of PON2 in BC cell metabolism. To analyze the potential role of PON2 enzyme in the physiopathology of bladder cancer, we transfected T24 cells (human bladder cancer cell lines) by using pcDNA3 and plKO.1 plasmid to induce the overexpression or the silencing of PON2 gene, respectively. Materials and methods: we tested the PON2 biological influence on cell migration by monolayer wound healing assay. Subsequently, T24 transfected cells were treated for 24 h with cisplatin and gemcitabine and then we measured the cell proliferation by MTT colorimetric assay and susceptibility to oxidative stress. In the harvested cells, we also investigated the activity levels of both Caspase-3 and Caspase-8 as key regulators of the apoptotic response. Results: the PON2 overexpression was responsible for an increased T24 cell viability against chemotherapy agents that resulted also in a ROS production and Caspases activation lower than the control. Conversely, the PON2 silenced gene reduced the strength of T24 cells to the chemotherapy treatment. The decreased cell viability was correlated to an increased production of ROS and to an activation of Caspases higher compared to the control. Conclusions: although these results require further confirmations to fully understand the potential implications of PON2 modulation in BC our data define the PON2 enzyme as a strong and novel molecular approach to control the tumor growth and its susceptibility to chemotherapeutics.

RUOLO DELLA PARAOXONASI-2 NEL TUMORE DELLA VESCICA: EFFETTO DEL SILENZIAMENTO E DELLA OVERESPRESSIONE DELLA PON2 SULLA PROLIFERAZIONE, MIGRAZIONE E CHEMORESISTENZA SCOPO: Nella popolazione mondiale, il tumore della vescica occupa il 5° posto tra i tumori più frequenti. Lo scopo di questo studio è quello di comprendere il coinvolgimento della Paraoxonasi-2 (PON2) nella carcinogenesi dello stesso. Le cellule T24 (linea cellulare di carcinoma della vescica umana) sono state trasfettate utilizzando i plasmidi pcDNA3 e plKO.1 per indurre rispettivamente l’overespressione o il silenziamento del gene PON2. MATERIALI E METODI: L’influenza della PON2 sulla migrazione cellulare è stata analizzata mediante il test di rimarginazione delle ferite in vitro. Le cellule T24 overespresse e silenziate per il gene della PON2, sono state trattate per 24 ore con Cisplatino e Gemcitabina e mediante il saggio colorimetrico MTT e l’utilizzo della 2,7-diclorofluoresceina diacetato. (DCFH-DA) sono state valutate, rispettivamente, la proliferazione cellulare e la suscettibilità allo stress ossidativo. Per comprendere l’implicazione della PON2 nell’apoptosi sono state valutate l’attività della Caspasi-3 e Caspasi-8. RISULTATI: l’overespressione della PON2 ha determinato, nelle cellule T24 trattate con chemioterapici, un aumento della proliferazione cellulare, dei livelli intracellulari dei ROS e della Caspasi-3 e Caspasi-8. Al contrario, il silenziamento della PON2 ha portato ad una riduzione della vitalità cellulare delle cellule T24 dopo trattamento chemioterapico. Infine si è osservato un aumento della produzione di ROS ed un'attivazione di entrambe le Caspasi 3 ed 8. CONCLUSIONI: sebbene questi risultati richiedano ulteriori conferme per comprendere appieno le potenziali implicazioni fisiopatologiche della PON2 nel cancro della vescica, i nostri dati propongono l'enzima PON2 quale biomarker utile per il monitoraggio della crescita tumorale e dei fenomeni di chemioresistenza.