Studio della composizione polifenolica, della capacità antiossidante e dell'effetto protettivo contro lo stress ossidativo di mieli monofloreali di Cuba

Several monofloral Cuban honeys were analyzed to determine their total phenolic, flavonoid, ascorbic acid, amino acid, protein and carotenoid contents as well as their radical-scavenging activity and their free radical formation capacity. The total phenolic, flavonoid and carotenoid contents varied considerably, and the highest values were obtained for Linen vine (Govania polygama (Jack) Urb) honey. The highest amino acid content was found in Morning glory (Ipomoea triloba L.) while Liven vine had the highest protein content. Similarly Linen vine honey had the highest antioxidant activity while the lowest was found in Christmas vine (Turbina corymbosa (L.) Raf). Ascorbic acid was absent. A significant (positive) correlation was found between the results of TAC obtained by parallel FIA-ABTS system and ORAC assay (r = 0.9565, p < 0.001). Similar correlations were also established between total phenolics and TAC, determined by either the ORAC (r = 0.9633; p < 0.001) or the TEAC assay (r = 0.9582; p < 0.001). A correlation between radical-scavenging activity and total phenolic content was found. Correlation existed also between color vs phenolics content, vs flavonoid content or between phenolic vs flavonoid. The scavenging and formation capacities of hydroxyl radical were determined using electron paramagnetic resonance (spin trapping), while superoxide radical scavenging were determined by the hypoxanthine/xanthine oxidase assay. Liven vine and Singing bean presented the highest scavenging capacity towards the hydroxyl radical. Liven vine and Morning glory also presented the highest values of superoxide radical scavenging activity, while the lowest values were found in Christmas vine honey. Hydroxyl radical formation was found in all honeys tested, Christmas vine honey showing the highest values. Identification and quantification of phenolics were carried out by HPLC-DAD-ESI/MS. Fourteen phenolic compounds could be identified (eight phenolic acids and six flavonoids), including three glycosylated derivatives. Similar contents of total phenolics were found in the different honeys, although they differed in their qualitative profiles. Honeys were fractionated by solid-phase extraction into four fractions, and the relative contribution of each fraction to TAC was calculated. Phenolic compounds were significant contributors to the antioxidant capacity of the honeys, but they were not uniquely responsible for it. The antioxidant activity appeared to be a result of the combined activity of a range of compounds including phenolics and other minor components. Honeys and their phenol extracts separated on the base of their hydrophobicity were evaluated for the ability to inhibit oxidative damage induced by radical species generated in the membrane of human erythrocytes and in the Wistar rat liver homogenates. In this study it was determined that honey and their phenolic fractions protect erythrocytes against 2,2’-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride-induced lysis. In this study we also found that Liven vine and Christmas vine honey has the capacity to decrease significantly the concentration of lipid hydroperoxides and malondialdehyde, produced during the lipid peroxidation process in rat liver homogenates and in membrane of human erythrocytes, showing that the ability to modulate production and scavenging of free radicals may contribute to the ability of some Cuban honeys to help in resolving some inflammatory diseases in which oxidative stress is involved.

Diversi mieli uniflorali cubani sono stati analizzati per determinare il loro contenuto totale di fenoli, flavonoidi, acido ascorbico, aminoacidi, proteine e carotenoidi, così come la loro attività radical- scavenging e la loro capacità di formare radicali liberi. Il contenuto totale di fenoli, flavonoidi e carotenoidi varia considerevolmente: i valori più alti sono stati ottenuti nel miele Linen vine (Govania polygama (Jack) Urb). Il più alto contenuto di aminoacidi è stato trovato invece nel miele Morning glory (Ipomoea triloba L.), mentre nel miele Liven vine è stato riscontrato il più alto contenuto proteico. Allo stesso modo il miele di Linen vine ha mostrato la maggiore attività antiossidante (TAC), mentre la più bassa è stata trovata in Christmas vine (Turbina corymbosa (L.) Raf). L'acido ascorbico non è stato trovato in nessun campione analizzato. Una correlazione significativa (positiva) è stata rilevata tra i risultati della TAC ottenuti in paralello con i saggi FIA-ABTS e ORAC (r = 0.9565, p < 0.001). Una correlazione simile è stata anche stabilita tra i fenoli totali e la TAC,determinata sia dall’ ORAC (r = 0.9633; p < 0.001) che dal saggio TEAC (r = 0.9582; p < 0.001). E’ stata inoltre trovata una correlazione significativa tra l'attività radical-scavenging e il contenuto fenolico totale e tra il colore vs i fenoli totali, vs il contenuto di flavonoidi e tra i fenoli vs i flavonoidi. Le capacità di radical- scavenging e la formazione di radicali ossidrili sono state determinate mediante risonanza paramagnetica elettronica (spin trapping), mentre la capacità di scavenging del radicale superossido è stata determinata mediante il saggio della ipoxantina / xantina ossidasi. Il miele Liven vite e Singing bean hanno presentato la più alta capacità antiossidante nei confronti del radicale ossidrile. Liven vite e Morning Glory hanno anche presentato i valori più elevati di attività scavenging del radicale superossido, mentre i valori più bassi sono stati trovati nel miele Christmas vine. La formazione dei radicali ossidrili è stata trovata in tutti i mieli esaminati, con il miele Christmas vine che mostra i valori più alti. L’ identificazione e la quantificazione dei composti fenolici sono state eseguite mediante HPLC-DAD-ESI/MS: quattordici composti fenolici sono stati identificati (otto acidi fenolici e sei flavonoidi), di cui tre sono derivati glicosilati. Contenuti simili di polifenoli totali sono stati riscontrati in tutti i tipi di miele, ma la differenza più importante è stata dal punto di vista del profilo qualitativo. Ogni campione è stato suddiviso mediante estrazione in fase solida in quattro frazioni ed è stato calcolato il contributo relativo di ciascuna frazione alla TAC. I composti fenolici sono stati trovati come importanti contributori alla capacità antiossidante del miele, ma non sono gli unici responsabili. La capacità antiossidante sembra essere infatti il risultato dell'attività combinata di una gamma di composti fenolici e di altre componenti minori. Inoltre, il miele e i suoi estratti fenolici, separati in base alla idrofobicità, sono stati valutati per la capacità di inibire il danno ossidativo indotto da radicali e generato sia nella membrana degli eritrociti umani che nell’ omogenato di fegato di ratto Wistar. In questo studio si è stabilito che il miele e le sue frazioni fenoliche sono in grado di proteggere gli eritrociti contro il danno ossidativo indotto dall’ AAPH (2,2 '-azobis (2-amidinopropane) dicloridrato). In questo studio abbiamo anche scoperto che i mieli Liven vine e Christmas vine hanno la capacità di diminuire significativamente la concentrazione di idroperossidi lipidici e di malondialdeide, prodotti durante il processo di perossidazione lipidica in omogenati di fegato di ratto e nella membrana degli eritrociti umani, mostrando che la capacità di modulare la produzione e lo scavenging dei i radicali liberi possono contribuire alla capacità di alcuni mieli cubani di aiutare a risolvere alcune malattie infiammatorie in cui è coinvolto lo stress ossidativo.